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pH和溫度對色譜峰的影響

放大字體  縮小字體 發布日期:2022-01-25  瀏覽次數:154
核心提示:pH 對保留時間的影響在反相色譜中隨著pH的增加,酸性化合物保留時間縮短,而堿性化合物延長;緩沖液可以緩沖溶液pH的改變,緩沖液
pH 對保留時間的影響

在反相色譜中隨著pH的增加,酸性化合物保留時間縮短,而堿性化合物延長;

緩沖液可以緩沖溶液pH的改變,緩沖液的定義是加入少量的酸或堿時能緩沖pH,就是說添加酸或堿時pH的變化很小。這個保持pH的能力就叫做緩沖能力,它是由緩沖液的濃度和緩沖鹽的pKa決定的,緩沖鹽在pKa附近的緩沖能力最大。表1列出的是液相中一些常用的緩沖鹽的pKa。注意這是在水中測的,沒有加有機溶劑。當加入有機溶劑時,pKa會有所變化,但是通常所有化合物的pKa,包括你的分析物的pKa都會有一樣的變化。

對于液相常用濃度來說,緩沖液應維持在緩沖鹽的pKa的1.5個pH單位左右,當濃度特別稀的時候,如低于5mM,就要把范圍縮小,大概+/-1個pH單位。


表1:常用緩沖鹽的pKa值(25℃)

緩沖鹽

pKa

醋酸鹽

4.75

銨鹽

9.24

硼酸鹽1

9.24

硼酸鹽2

12.74

硼酸鹽3

13.80

檸檬酸鹽1

3.13

檸檬酸鹽2

4.76

檸檬酸鹽3

6.40

2-(N-嗎啉代)乙磺酸(MES)

6.15

草酸鹽1

1.27

草酸鹽2

4.27

磷酸鹽1

2.15

磷酸鹽2

7.20

磷酸鹽3

12.38

三氯乙酸

0.52

三乙醇胺

7.76

三乙胺

10.72

三氟乙酸

0.50

三羥甲基氨基甲烷(Tris)

8.08

建議在開發方法的時候首先要選擇緩沖鹽和 pH范圍,然后用溶液的選擇性微調分離。這個策略快速而高效,而且可以讓你避免陷入緩沖液pH的泥潭。



溫度

1)建議溫度設置在25℃-40℃,適當的柱溫保持良好的保留時間的重現性,一定程度上提高柱效,增加分離度。

2)柱溫過低,流動相的粘度下降,色譜柱的背壓降低。

3)柱溫太高,與檢測器之間溫差太大,使峰變形,加快離子對試劑或緩沖鹽對硅膠基質的攻擊,硅膠溶解,縮短色譜柱的壽命;柱溫太低,使得需要制冷的柱溫箱,硬件要求太高,不利于方法的推廣。

4)溫度的改變會導致保留時間漂移,如果儀器自動進樣過夜或過周末,就會發現保留時間隨著實驗室溫度的改變而產生漂移,顯然這種問題用柱溫箱就可以避免。 
編輯:songjiajie2010

 
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關鍵詞: 色譜峰
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